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純化回收
發(fā)布者：莊盟生物發(fā)布時(shí)間：2015-04-01瀏覽次數(shù)：7720次
■純化回收簡(jiǎn)介
采用硅基質(zhì)材料在高鹽條件下特異地與DNA結(jié)合，從而去除雜質(zhì)。在低鹽條件下洗脫DNA得到高純度DNA。本公司所使用的硅基質(zhì)吸附材料及玻璃奶吸附材料，能夠有效的去除蛋白、鹽類(lèi)及有機(jī)物質(zhì)。
■凝膠回收常見(jiàn)問(wèn)題分析
未回收或回收率低
1. 膠塊未全部溶解：溶解凝膠時(shí)應(yīng)置于55℃水浴，期間上下顛倒混勻數(shù)次，確定膠塊完全溶解后再進(jìn)行下一步驟。
2. 膠塊太大（>400 mg）：如果需要處理的膠塊太大，應(yīng)先將其切成小塊，然后分兩次回收。
3. 電泳緩沖液pH值太高：硅膠膜在高鹽及低pH值（pH≤7.5）時(shí)可結(jié)合DNA，在低鹽及高pH值（pH≥8）條件下洗脫。如果電泳緩沖液pH值太高，會(huì)導(dǎo)致DNA無(wú)法結(jié)合或降低結(jié)合率?？稍谌苣z后加入3M乙酸鈉（pH 5.0）10μl，將pH值調(diào)至7.5以下。
4. 漂洗液中未加無(wú)水乙醇：第一次使用前應(yīng)在漂洗液中加入無(wú)水乙醇。漂洗液每次用后應(yīng)擰緊瓶蓋，以免乙醇揮發(fā)，降低回收率。
5. 洗脫緩沖液不合適：DNA只在低鹽溶液中才能被洗脫，如試劑盒中的洗脫緩沖液TE (10 mM Tris·Cl, pH 8.5)或水。洗脫效率還與pH值有關(guān)。最大洗脫效率在pH 7.0–8.5間。當(dāng)用水洗脫時(shí)請(qǐng)確保其pH值在此范圍內(nèi)。
6. 洗脫緩沖液未加在離心柱中間，尤其使用較少量洗脫緩沖液時(shí)：應(yīng)滴加在離心柱正中間，并放置1–2分鐘，再離心。
